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[帮助]重复使用WB电影来开发颜色。

来源:365bet线上娱乐 作者:365bet亚洲 时间:05-30 04:54:25 点击:



Western印迹分析通常需要在第一轮杂交后重复使用相同的膜进行第二次/第三次杂交。最常见的情况是:
(1)内标杂交。
内标是通常在不同组织细胞中以相等量表达的蛋白质,并且通过杂交内标,靶蛋白的表达增加或减少。
(2)在信号转导研究中检测到其他感兴趣的蛋白质。
(3)检测靶蛋白的磷酸化或甲基化后,连续检测总靶蛋白的表达。
在同一膜上多次检测蛋白质不仅可以保留蛋白质样品,还可以避免昂贵的步骤,如蛋白质电泳和膜转移,并消除由于充电造成的错误。可比性更强大。
在新一轮杂交之前,在第一轮杂交期间首先除去附着于膜的一抗和二抗。
常规方法是使用具有强烈刺激性气味的b 2巯基乙醇,并在55℃水浴中搅拌30分钟。
我使用的是不含β-巯基乙醇的Wlaterson Western Stripping Solution。在先前杂交期间与膜结合的一抗和二抗只能在室温下移除20-30分钟。
同时,它不会破坏膜中的蛋白质抗原,也不会削弱蛋白质信号。它可以重复使用2到4次,底部也很干净。



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